霜折

实验目标#

复苏冻存的 RH7777 NPC1L1-EGFP 稳转细胞株，观察细胞的存活、贴壁与恢复情况，为后续实验建立状态稳定的细胞培养体系。

实验过程与观察#

问题分析#

针对首次复苏后贴壁细胞较少、整体状态较差的问题，我们讨论后提出了以下两种可能原因：

1. 复苏过程中 DMSO 暴露时间可能偏长。 细胞化冻后未能立即加入培养基稀释冻存液，可能延长了细胞接触 DMSO 的时间，从而对细胞存活和恢复造成额外影响。
2. 复苏后的接种密度可能过低。 该批冻存细胞原本来源于一个 6 cm 培养皿，复苏后直接接种至 15 cm 培养皿，细胞在较大的培养面积中分布较为稀疏。较低的细胞密度及较少的细胞间接触，可能不利于细胞贴壁和后续增殖。

以上分析目前仅为推测，仍需结合不同冻存批次在较小培养皿中的复苏结果进一步判断。

10 月 13 日：第二次复苏#

根据首次复苏结果，10 月 13 日调整复苏方案，将培养皿由 15 cm 改为 6 cm，以提高复苏后的细胞密度。同时分别选取 2026 年 5 月 25 日和 6 月 1 日两个冻存批次进行复苏，以比较不同批次的恢复情况。

后续将比较两组细胞的贴壁、形态和培养基状态，辅助判断首次复苏异常更可能与操作条件、接种密度还是特定冻存批次有关，并观察是否存在污染迹象。

下一步计划#

• 10 月 15 日观察两组细胞的贴壁、形态、密度及培养基状态；
• 根据细胞状态完成换液；
• 拍摄并保存各组显微镜视野，记录放大倍数和拍摄时间；
• 查询环糊精包载胆固醇的制备方法，整理所需仪器、试剂和基本操作条件；
• 根据查询结果拟定下一阶段实验方案，并请师兄师姐协助审阅和修改。

后续记录建议#

后续观察时可按下表补充结果，便于比较两个冻存批次：