霜折

先理解研究问题#

NPC1L1 是参与肠道胆固醇吸收的蛋白，也是依折麦布的作用靶点。项目的想法是以 NPC1L1 的相关结合区域为设计对象，生成候选小肽，逐步检验其结构预测、细胞行为和胆固醇摄取效应。我们的研究问题可以拆成三层：

1. **设计层：**候选肽在计算模型中是否有合理的结合构象？
2. **细胞层：**候选肽是否改变 NPC1L1 的定位或转运相关表现？
3. **功能层：**候选肽是否降低细胞对胆固醇的摄取？

这三层证据不能互相代替。结构模型的分数不能证明真实结合；荧光定位变化也不能直接证明胆固醇摄取下降。更不能由目前的细胞预实验推断临床疗效。

项目是怎样推进的#

计算阶段已经选出四条进入初步细胞观察的候选肽。早期记录中的较高 ipTM 等数值是模型对复合物界面的预测指标，不等于结合亲和力、抑制率或成药性。不同计算批次的候选和指标也不能直接混为一组比较。

在 5 月 27 日的实验记录（16） 中，四条候选肽与依折麦布对照被放入同一轮细胞定位预实验。记录中的粗定量显示：Peptide 4 的膜近端荧光比例在四条候选肽中最高；Peptide 2 的该比例低于胆固醇回补组。这里的“膜近端”是图像分析指标，尚未严格区分细胞表面与胞内 NPC1L1。铺板密度也存在不均匀的问题，因此这轮结果适合用来决定复筛重点，暂不适合给候选肽下最终排序。

当前最重要的证据缺口#

截至上述记录，项目尚未完成 Filipin 胆固醇染色的功能验证。这意味着现在不能说某条小肽已经抑制了胆固醇摄取。EGFP 反映的是 NPC1L1 的总体定位信号，不能单独证明肽与 NPC1L1 直接结合，也不能说明细胞内胆固醇减少。

下一轮工作应先把可重复的细胞现象建立起来：统一各组细胞密度和成像条件，增加重复与盲法图像分析，保留依折麦布阳性对照和合适的阴性对照；然后用胆固醇染色或其他合适的摄取读数回答功能问题。若要区分 NPC1L1 的表面分布与总表达，可按原方案评估不透膜 anti-Myc 染色。候选肽的稳定性、毒性和浓度依赖性也需要分别检验。

新成员怎样接手#

建议先看《研究综述》的研究背景，再看《实验设计》的技术路线，最后沿着实验记录追踪实际进度。原始 PDF 均保存在项目文件夹 生科赛 中；公开博客只放经过整理的概览，不放未公开的候选序列、原始图像或完整实验参数。

加入后的第一件事，是和我一起把“候选肽编号—对应计算结果—合成批次—细胞处理组—原始图片”对成同一张追踪表。第二件事，是确定你负责哪一块：计算复核、细胞实验、图像定量，或文献与记录整理。每次更新都写明日期、材料版本、对照、重复数、原始文件位置，以及观察到的事实与自己的解释。这样我们才能知道下一次实验究竟解决了哪个问题。

这个项目最值得保持的习惯，是让每一个结论都能回到它的原始记录。我们已经有候选、有模型、有第一轮细胞观察；下一步要靠可重复的功能证据，把“可能有效”推进到“有证据支持”。